viernes, 22 de diciembre de 2017

Técnicas de Edición Genómica en las Cardiopatías Isquémicas

Tema: Terapia Génica con un plásmido que expresa el VEGF121 para el tratamiento de la Cardiopatía Isquémica Crítica
Tipo de Terapia Génica: Somática In vivo
Gen o genes a tratar: Gen del VEGF121 regulado por un promotor de citomegalovirus
Vector: pUC19 (4039pb)
Órgano a tratar: Corazón
Vías de administración: Durante toracotomía, inyección de 0.5mg de pVEGF121 en  1mL de solución salina por vía intramiocárdica, que como todo proceso quirúrgico es invasivo y tuvo una duración de entre  60-130min.
Resultados: La mayoría de los pacientes eran de sexo masculino (83%), 62% eran blancos y 33% mestizos. La edad osciló entre 49 y 71 años. 
Los eventos adversos no tuvieron relación con la concentración del producto en la sangre, puesto que ocurrieron durante el procedimiento perioperatorio en momentos que no era posible aun la expresión del VEGF.
Un mes despúes del tratamiento, los episodios semanales de angina de pecho disminuyeron drásticamente con ligeras oscilaciones a los tres y seis meses. 
La efectividad de este procedimiento también dependía de la administración y de la severidad de la enfermedad en estos pacientes, de manera que los resultados fueron mas positivos en aquellos que lo realizaron por vía intramiocárdica.
 
















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domingo, 17 de diciembre de 2017

Terapia con Stem cells en las Cardiopatías Isquémicas



Tema:  TRASPLANTE AUTÓLOGO "POTENCIADO" DE CÉLULAS MADRE CD34 EN PACIENTES CON ANGINA REFRACTARIA
Objetivo: Regenerar, reparar o sustituir el tejido dañado con el fin de restaurar su función.
Tipo de stem cells:  Células de la médula ósea, que pueden ser aisladas o mixtas, las que han mostrado hasta este momento mayor potencial angiogénico y las más utilizadas son las células mononucleares hematopoyéticas CD34+; Multipotentes.
Método de obtención: La obtención de la médula ósea se realizó por la técnica de punción ósea con aguja en la cresta ilíaca posterior, obteniendo un volumen de 100 mL. Las Células mononucleares fueron obtenidas mediante gradiente de densidad en sala blanca en condiciones de esterilidad y se determinó el número de células mononucleares y células madre CD34+. Luego se realizó marcación con anticuerpos monoclonales mediante ELISA.
Método utilizado: Para la administración de las células fueron enviadas en 50mL de solución salina con 1% de albúmina sérica humana, el cual se realizó por vena cefálica, basílica o ante cubital en un lapso de 15-20 minutos.
Usos: 
  • CP: Conducir al aumento de micro circulación y perfusión miocárdica a pesar de la oclusión permanente de vasos epicárdicos.
  • MP: Aumento de la densidad capilar, mejoría de clase funcional, umbral de angina.
  • LP: Mejora la  frecuencia de angina y la calidad de vida.
Resultados: En el grupo de pacientes con esta intervención se encontró aumento significativo en la mejoría del umbral de angina isquemia en la tolerancia al ejercicio.
                      
Referencias:
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sábado, 9 de diciembre de 2017

TIPOS DE ADN RECOMBINANTE EN LAS CARDIOPATÍAS ISQUÉMICAS


ADN RECOMBINANTE EN LA NATURALEZA 

Los plásmidos: son moléculas de ADN que replican de forma independiente al cromosoma bacteriano y que tienen la capacidad de movilizar genes horizontalmente, los de tipo ColE1 tienen una gran importancia en la resistencia a antibióticos. Cuando una bacteria adquiere resistencia a antibióticos mediante la transferencia horizontal de un plásmido, compromete su crecimiento debido al coste biológico asociado al replicón. Esto genera que, en ausencia de presión selectiva, las bacterias que porten plásmidos serán menos competitivas comparado con las bacterias libres de replicones, estos pequeños replicones portan algunos determinantes de resistencia a los antibióticos.









Crossing-over: es el intercambio de material genético durante la meiosis en la primera etapa (Profase) , que incluye la ruptura de un cromosoma materno y uno paterno (homólogos),  al aparearse estos mediados por el Complejo Sinaptonémico, se produce un intercambio de las correspondientes secciones de ADN y su unión al otro cromosoma. La recombinación genética resultante hace aumentar en gran medida la variación genética entre la descendencia de progenitores que se reproducen por vía sexual.
 

ADN RECOMBINANTE ARTIFICIAL 

                                    
La estreptoquinasa es un activador del plasminógeno, proveniente de células procarióticas, las cuales habitualmente son secretadas al medio de cultivo por un gran número de estrepto cocos de diferentes serogrupos. Por ser proteína de origen bacteriano, se han detectado algunas respuestas antigénicas a la misma. Su peso molecular es de 47 000 dalton.
Durante la interacción de la estreptoquinasa, con el plasminógeno que se encuentra en plasma humano, se ha encontrado que la proteína es capaz de transformar a este último en plasmina, la cual presenta activador proteolítica y puede degradar coágulos de fibrina a productos solubles, constituyendose así como agentes trombolíticos en el tratamiento de enfermedades que colectivamente representan una de las mayores causas de muerte del mundo, como son el infarto cardiaco.




PREGUNTAS:


  1. ¿Qué tipos de recombinación de los ácidos nucleicos existe en la naturaleza?
El ADN recombinante que no se obtiene a partir de técnicas moleculares desarrolladas en laboratorios se conoce como RECOMBINACIÓN GENÉTICA, que ocurre de normalmente en la naturaleza:
  • Recombinación en la reproducción viral
  •  Recombinación por transformación bacteriana
  •  Cambio de clase de inmunoglobulinas
  • Conversión génica
  • Recombinación no homóloga
La recombinación de eucariotas comúnmente se produce durante la meiosis como entrecruzamiento cromosómico entre los cromosomas apareados, enzimas llamadas recombinasas catalizan las reacciones de recombinación natural:
  • Recombinación homóloga (Profase I Meiosis)
  • Entrecruzamiento cromosómico (Anafase I Meiosis)
  • Recombinación específica de sitio (virus-bacteriófago T4 y plásmidos)
  • Recombinación no homóloga (células de mamíferos)

    2.¿Qué utilidad tiene la tecnología del ADN recombinante? 
La DNA Recombinante (rDNA) tiene muchas aplicaciones en la sociedad del día de hoy:
  •  Los científicos han desarrollado numerosos avances que pueden ser utilizados para prevenir la muerte de las plantas debida a insectos, insecticidas, herbicidas e incluso por las heladas.
  • Las hormonas como la insulina o la hormona de crecimiento humanas, son creadas en cuerpos que funcionan normalmente. 
  • Sirve para enriquecer un alimento: por ejemplo, la composición de la leche,  para mejorar su valor nutricional, y preparar proteínas recombinantes para su uso farmacéutico.
  • Los médicos forenses pueden utilizar el ADN presente en la sangre, el semen, la piel, la salivapelo en la escena de un crimen para identificar al responsable.
Referencias:
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domingo, 3 de diciembre de 2017

Pruebas Moleculares para el diagnóstico de Cardiopatías Isquémicas


El análisis de microarrays de ADN es una de las nuevas tecnologías de más rápido crecimiento en el campo de la investigación genética. Los científicos están utilizando microarrays de ADN para investigar los factores genéticos que influyen en las anomalías cromosómicas estructurales, variaciones en el número de copias (CNV), estas se refieren a la eliminación, inserción, duplicación y complejas variaciones de locus múltiples que varían de 1 kb a varios megabits.
                                   

TEMA:
Aplicación de hibridación genómica comparativa-array en tetralogía de Fallot
Objetivo: 
Promover en las personas un conocimiento de la patogénesis, orientan el diagnóstico y el tratamiento de enfermedades relacionadas.
Tipo de muestra biológica:
Se recogió sangre venosa (3 ml) de 86 pacientes con tetralogía de Fallot (TOF) mediante análisis de cariotipo G-banging y aCGH se inoculó en RPMI1640.
Tipo de ácido nucleico:
ADN
Técnica molecular utilizada:
Microarrays de ADN
Gen cuantificado: gen UCSC
Análisis: 
Al realizar estudios en la sangre venosa de estos pacientes se detectaron CNV en todo el genoma mediante chips Agilent SurePrint G3 Human CGH Microarray que contenían aproximadamente 60,000 sondas marcadas con copia. El 99.34% de los CNV eran patógenos siendo  más largos de 300 kb y los causantes de estas patologías.
                     
Referencias: 

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